Nghiên cứu biểu hiện và cố định chitosanase lên bề mặt lợi khuẩn Lactobacillus plantarum WCFS1 theo cơ chế NON-GMO

Abstract

Lysin motif domains là những miền protein được tìm thấy rộng rãi ở các protein ngoại bào hay các thụ thể tế bào. Chúng có thể liên kết không cộng hoá trị lên các polysaccharides như peptidoglycan. LysM domains có thể được dùng để mang các protein cố định lên thành tế bào của vi khuẩn. Trong nghiên cứu này, hai móc neo LysM 3014 và LysM 2162 có nguồn gốc từ transglycosylase Lp_3014 và transglycosylase Lp 2162 được dùng để cố định chitosanase lên thành tế bào lợi khuẩn Lactobacillus plantarum WCFS1. Đầu tiên, gene mã hoá cho các enzyme mang móc neo được tạo dòng ở Escherichia coli Rosetta. Phương pháp điện di SDS-PAGE và Western blot được dùng để kiểm tra biểu hiện gene. Kết quả cho thấy chitosanase nối lần lượt với hai loại móc neo LysM 3014, LysM 2162 được biểu hiện thành công ở E. coli Rosetta. Hoạt độ của enzyme mang móc neo LysM 3014 và LysM 2162 lần lượt là 283.573±10.6 U/ml và 288.01+9.5 U/ml. Enzyme sau khi kiểm tra hoạt tính sẽ được cố định lên L. plantarum. Sau khi cố định thành công lên L. plantarum, chúng tôi đã kiểm tra hoạt tính chitosanase cố định. Kết quả thu được: hiệu quả cố định chitosanase với móc neo LysM 3014 và LysM 2162 lần lượt là 42.88+8.7% và 48.47±9.3%. Từ kết quả thí nghiệm, chúng tôi thấy rằng chitosanase đã cố định thành công với hiệu suất khá cao dẫn đến mở ra nhiều triển vọng trong việc cố định enzyme lên bề mặt của vi sinh vật không biến đổi gene như Lactobacillus plantarum. Qua đó chúng tôi sẽ hướng đến việc cố định enzyme theo phương thức không biến đổi gene (NON-GMO) để các sản phẩm được đáp ứng các tiêu chuẩn an toàn trong sản xuất.